随着分子生物学的不断发展,PCR技术已被运用到多种领域,而影响PCR实验成败的因素有很多,其中Taq DNA聚合酶的选择是一关键因素。目前已经市场化的Taq酶有多种:普通Taq酶,热启动Taq酶,高保真聚合酶,长片段扩增酶,因其各自的适用性不同,不当的选择往往会使实验失败。本文根据客户考虑的常用指标如特异性、保真性、扩增片段长度,我们对这几种酶进行归类,其性质用途便一目了然,从而帮助我们更好的选择。
指标 | 普通Taq酶 | 热启动Taq酶 | 高保真聚合酶 | 长片段高保真酶 |
通用标准 | 错配率 | 错配率 | 错配率 | 错配率 |
错配率(相对) | 2×10-4 -10-5 | 10-6 | 10-7 | 10-7 |
校正功能 | 无 | 无 | 有 | 有 |
热启动 | 否 | 是 | 否 | 否 |
目标片段长度 | <6kb(简单模板) | <10kb(简单模板) | <20kb(简单模板) <15kb (复杂模板) | <35kb(简单模板) <18kb (复杂模板) |
延伸时间(推荐) | 2kb/min | 1.5kb/min | 1.5-2kb/min | 1.5-2kb/min |
优势 | 扩增速度快 | 高特异性 高灵敏度 高效率扩增 | 保真度为pfu的2倍 速度快,5kb延伸只需25s 适用于粗提取样品扩增 | 专门针对10-35kb的模板进行扩增 具有高保真性 |
缺点 | 扩增特异性差,非特异性产物较多 | 扩增无保真性 | 无热启动的功能,操作要在低温下进行 | 无热启动的功能,操作要在低温下进行 |
应用 | 常规PCR | 常规PCR 荧光定量PCR DNA测序 TA克隆 | 应用于保真性要求高的方面:基因筛选、分子诊断、克隆表达、突变检测 | 能够35kb的目标片段,其他酶无此扩增功能,且具备保真性 |