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单抗制备 杂交瘤测序 蛋白表达

Taq DNA聚合酶选购指南

随着分子生物学的不断发展,PCR技术已被运用到多种领域,而影响PCR实验成败的因素有很多,其中Taq DNA聚合酶的选择是一关键因素。目前已经市场化的Taq酶有多种:普通Taq酶,热启动Taq酶,高保真聚合酶,长片段扩增酶,因其各自的适用性不同,不当的选择往往会使实验失败。本文根据客户考虑的常用指标如特异性、保真性、扩增片段长度,我们对这几种酶进行归类,其性质用途便一目了然,从而帮助我们更好的选择。

对比表格

指标普通Taq酶热启动Taq酶高保真聚合酶长片段高保真酶
通用标准错配率错配率错配率错配率
错配率(相对)2×10-4 -10-510-610-710-7
校正功能
热启动
目标片段长度<6kb(简单模板)<10kb(简单模板)<20kb(简单模板)
<15kb (复杂模板)
<35kb(简单模板)
<18kb (复杂模板)
延伸时间(推荐)2kb/min1.5kb/min1.5-2kb/min1.5-2kb/min
优势扩增速度快高特异性
高灵敏度
高效率扩增
保真度为pfu的2倍
速度快,5kb延伸只需25s
适用于粗提取样品扩增
专门针对10-35kb的模板进行扩增
具有高保真性
缺点扩增特异性差,非特异性产物较多扩增无保真性无热启动的功能,操作要在低温下进行无热启动的功能,操作要在低温下进行
应用常规PCR常规PCR
荧光定量PCR
DNA测序
TA克隆
应用于保真性要求高的方面:基因筛选、分子诊断、克隆表达、突变检测能够35kb的目标片段,其他酶无此扩增功能,且具备保真性