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FussionTM超保真聚合酶
| For PCR | Enzyme: 5u/μl | Cat.: E2055 |
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FussionTMHi-Fi DNA Polymerase（FussionTM超保真聚合酶）是由南京德泰生物公司生产的高质量高标准的DNA聚合酶，具有高保真度，高产量和快速合成等优异性能，适用于各种PCR反应。在难扩增序列、粗提取样品等方面有很好的扩增效果，受到了广泛的好评。
活性
用仓鼠卵巢细胞DNA作为模板/引物，在72℃，30分钟，摄入10 nmol dNTP的活性定义为1个活性单位(U)。
产品优势
- 高扩增成功率
- 高扩增效率
- 出色的延伸性
- 高保真度
- 平端克隆，3‘→ 5’外切酶活性
应用
| 常规PCR |
| 富含AT/GC复杂模板扩增 |
| cDNA克隆 |
| 文库构建 |
| 定点突变 |
包装及报价
| 250U | 300元 |
| 500U | 510元 |
| 1000U | 900元 |
制品内容
| FussionTM Hi-Fi |
| 10×buffer(Mg2+) |
| 5×buffer(Mg2+) |
| dNTP mixture 10mM each |
| ddH2O PCR grade |
模板加入量说明
| 人类基因组DNA | 10-200ng |
| 大肠杆菌基因组DNA | 100pg-100ng |
| λDNA | 100pg-100ng |
| 质粒DNA | 100pg-10ng |
PCR反应体系
| 试剂 | 体积 | 最终浓度 |
| 10×Buffer(Mg2+) | 5μl | 1× |
| dNTP 10mM each | 1μl | 200uM each |
| primer 1 | 1μl | 0.2~0.5uM |
| primer 2 | 1μl | 0.2~0.5uM |
| Template | 0.1ng-0.5ug | |
| FusionTM | 1μl | 0.1U/ul |
| ddH2O PCR grade | Up to 50μl |
注：冰上配置PCR反应体系， DNA聚合酶最后加入到PCR体系中
PCR反应条件
| 2 step protocol | 3 step protocol | ||||
| 步骤 | 温度 | 时间 | 温度 | 时间 | 循环数 |
| 预变性 | 98℃ | 30s | 98℃ | 30s | 1 |
| 变性 | 98℃ | 10s | 98℃ | 30s | 25~30 |
| 退火 | – | – | 50-72℃ | 10-30s | |
| 延伸 | 68℃ | 15-30s/kb | 72℃ | 15-30s/kb | |
| 终延伸 | 72℃ | 5-10min | 72℃ | 5-10min | 1 |
注：一般推荐25-35个循环。对于长片段扩增，可以适当降低循环数至20
案例介绍
以人类基因组DNA为模板扩增0.5k 0.8k 1k 1.6k 2.2k 4.2k的PCR片段
以小鼠动力蛋白全长cDNA为模板扩增1K 2K 3K 4K 8K的PCR片段
1,2：FussionTM Hi-Fi DNA Polymerase
3,4：KOD DNA Polymerase
5,6：PFU-ultra DNA polymerase
3,4：KOD DNA Polymerase
5,6：PFU-ultra DNA polymerase
以人类基因组为模板扩增Vinculin 基因片段
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