GST pull-down服务

GST融合蛋白沉降技术(GST pull-down)利用了GST对谷胱甘肽(GSH)偶联球珠的亲和性,将GST融合蛋白与谷胱甘肽偶联球珠结合,并从蛋白的混合液中纯化得到与GST融合蛋白相互作用的蛋白。该法可以鉴定与已知蛋白相互作用的未知蛋白,也可鉴定两个已知蛋白间是否存在相互作用。GST pull-down的成功应用取决于是否有足够多的可溶性GST重组融合蛋白,德泰生物可以制备GST融合蛋白,并承诺不成功零收费。

我们的优势

  • 设置多组对照,充分排除干扰因素,结果判断更加精准;
  • 实验重复进行两次,排除随机因素影响,实验结果更加可靠;
  • 拥有完整的下游配套,可以利用BLI技术进行进一步定量分析;
  • 使用银染技术,灵敏度为考马斯亮蓝100倍,SDS-PAGE电泳结果更加清晰;
  • 可以提供从GST蛋白制备到蛋白互作检测的一站式服务,让您更加的省心;

GST pull-down服务内容

服务内容 客户提供 周期 交付 价格
分子间相互作用分析
(GST pull-down)
  • 序列
  • 纯化蛋白
  • 动植物的细胞组织
  • 细胞裂解液
~2周 相互作用分析报告(包含SDS-PAGE图、WB结果等) 询价

注:如果客户提供序列,将由德泰负责GST融合蛋白或靶蛋白的制备,最终在交付互作分析报告的同时也会交付>90%纯度的蛋白。

GST pull-down应用

  • 证明两种已知蛋白间可能存在的相互作用
  • 寻找与已知蛋白发生相互作用的未知分子

GST pull-down检测原理

利用重组技术将探针蛋白与GST融合,融合蛋白通过GST与固相化在载体上的GSH亲和结合。当与融合蛋白有相互作用的蛋白(靶蛋白)通过层析柱时或与此固相复合物混合时就可被吸附而分离。

GST pull-down实验原理

图1:GST pull-down实验原理

实验案例

Gst pull-down服务实验案例

图2:SDS-PAGE银染图

Line 1: GST标签

Line 2: 柱+GST标签

Line 3: 柱+GST标签+蛋白A流出

Line 4: 柱+GST标签+蛋白A洗杂

Line 5: 柱+GST标签+蛋白A洗脱

Line 6: GST融合蛋白B

Line 7: 柱+GST融合蛋白B

Line 8: 柱+GST融合蛋白B+蛋白A流出

Line 9: 柱+GST融合蛋白B+蛋白A洗杂

Line 10:柱+GST融合蛋白B+蛋白A洗脱

Line 11:Marker

Line 12:蛋白A

Line 13:柱+蛋白A流出

Line 14:柱+蛋白A洗杂

Line 15:柱+蛋白A洗脱

该案例为验证蛋白A与蛋白B之间是否存在相互作用,设置多组对照实验,排除掉所有的干扰选项,确保结论准确性。由Line 1~Line 5可得到结论:蛋白A不与GST标签吸附;由Lin12~line15可得到结论:蛋白A与纯化柱不存在非特异性吸附;由line6~line10可得到结论:蛋白A与纯化柱-GST-蛋白B复合物发生了结合。排除掉蛋白A与GST标签蛋白进行吸附与蛋白A与纯化柱进行吸附等可能的干扰因素,最终得到结论:蛋白A与蛋白B发生了结合,两者存在相互作用。

GST pull-down优缺点

优点 缺点
  • 操作简便,可直接检测是否有相互作用
  • 需要制备足够量的可溶性重组蛋白
  • 只能检测稳定或者强烈的相互作用
  • 蛋白相互作用会受到内源性蛋白质的干扰

订购流程

请您联系我们/在线咨询/填写《分子间相互作用询价表》发送至Sales@DetaiBio.com邮箱,我们将为您设计最佳方案。

仅供科研

联系我们

电话:(025)5889-4959

咨询:Sales@DetaiBio.com

地址:南京市高新开发区星火路10号

德泰生物科技(南京)有限公司 Detai Biologics Co.,Ltd ©2018 All Rights Reserved

南京市高新技术开发区星火路10号 Sales@DetaiBio.com English