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单抗制备 杂交瘤测序 蛋白表达

LonEZTM长片段高保真聚合酶

For PCREnzyme: 5u/μlCat.: E3055

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LonEZTM长片段高保真聚合酶是南京德泰生物新推出的专为长片段PCR设计的高保真聚合酶。该酶是将单链DNA结合蛋白和聚合酶活性片段巧妙地融合在一起,通过重组表达获得。可轻松实现对35kb目标片段的精准扩增。LonEZ 不仅有很好的长片段扩增能力,还有大于Pfu的高保真性,是基因组长片段PCR及相关实验的推荐用酶。

活性

以仓鼠卵巢细胞DNA作为模板/引物,在72℃,在30分钟摄入10nmol dNTP的活性定义为1个活性单位(U)。

产品优势

  1. 长片段扩增:以λDNA为模板,轻松实现35kb基因扩增
  2. 高保真:通过扩增LacZ基因,蓝白斑验证,保真度为Pfu 1.6倍
  3. 速度快:5kb目的片段扩增,延伸只需25秒

应用

常规PCR
长片段PCR
cDNA克隆

制品内容

LonEZTM高保真聚合酶
10×buffer(Mg2+)
5×buffer(Mg2+)
5×df buffer
dNTP mixture 10mM each
ddH2O PCR grade

模板加入量说明

人类基因组DNA0.1~1µg
大肠杆菌基因组DNA10ng~100ng
λDNA0.5~10ng
质粒DNA0.1-10ng

PCR反应体系

试剂体积最终浓度
10×Buffer(Mg2+)5μl
dNTP 10mM each4μl0.8mM each
primer 11μl0.5uM
primer 21μl0.5uM
Template0.1ng-0.5ug
LonEZTM(5U/ul)1μl0.1U/ul
ddH2O PCR gradeUp to 50μl

注:冰上配置PCR反应体系, DNA聚合酶最后加入到PCR体系中

PCR反应条件

步骤温度时间循环数
预变性95℃3min1
变性95℃30s25~30
退火60℃30s
延伸72℃10min
终延伸72℃15min1

案例介绍

LonEZ长片段扩增酶以λDNA为模板,PCR扩增1.2kb-30kb目标片段,有很好的扩增效果

以λDNA为模板,PCR扩增1.2kb-30kb目标片段,有很好的扩增效果

高保真聚合酶以人类基因组DNA为模板扩增

M: λHand III marker    1: 5U的普通Taq酶
2,3,4: 1U,2U,5U的LonEZ    5: 5U的KOD
6,7,8: 1U,2U,3U的LonEZ

超保真聚合酶以小鼠动力蛋白全长cDNA为模板扩增1K 2K 3K 4K 8K的PCR片段

模板:人类基因组
目的片段:15kb
1:普通Taq酶
2:LA-PCR Kit(Brand T)
3:LonEZ
DNA Marker:10k to 5k

高保真酶以人类基因组为模板扩增Vinculin 基因片段

模板:λDNA
目的片段:35kb
1,2:LonEZ
DNA Marker:10k to 0.5k