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鼠单抗制备 兔单抗制备 杂交瘤测序 蛋白表达

重组蛋白表达纯化

德泰生物致力于为客户提供高纯度、低成本的活性重组蛋白,包括各类受体、细胞因子、生长因子、转录因子、激素、酶、毒性蛋白、病毒抗原等,满足客户下游科研实验研究的需求。德泰拥有先进的蛋白表达技术及丰富的蛋白表达经验,完成了多种正常条件下不表达、难表达、表达量低的蛋白的制备。

迄今为止,德泰共交付3000+组重组蛋白(各类野生型蛋白及突变型蛋白)。交付的蛋白被用于抗体制备、ELISA、IHC、药物研究、动物实验、晶体结构分析、体外酶活测定、细胞实验等下游实验。

为什么选择我们?

  • 高成功率:自建实验室,自主研发多项实验技术,实验成功率大于98%,交付的近千组蛋白已成功应用于抗原生产,抗体药研发,诊断试剂,疫苗研究等领域
  • 高纯度蛋白:四大蛋白纯化方法,结合AKTA蛋白纯化系统,可定制高纯度蛋白(>95%),应用于酶制剂,晶体结构分析,生物活性实验等
  • 一站式服务:只需提供基因序列,德泰完成载体构建,蛋白表达,蛋白纯化(内毒素去除/RNA酶去除),抗体制备,相互作用分析等一站式服务。德泰蛋白表达技术平台  

    蛋白表达技术平台设施

重组蛋白表达系统

重组蛋白有很多的应用,包括抗原制备,蛋白相互作用,酶学分析,及药物靶点研究。选择合适的蛋白表达系统,对下游蛋白的应用有重要影响。蛋白功能,产率,成本是优先考虑的几个因素。德泰为您提供多个重组蛋白表达系统,满足您的不同需求。

原核蛋白表达系统


提供多种重组质粒和转化宿主菌株,优化温度、IPTG浓度、培养时间等表达条件,根据最高产量参数组合进行放大。

适用于表达原核蛋白,简单的真核蛋白以及同位素标记蛋白等。
哺乳动物表达系统


自建细胞房,自主研发高表达载体,十几年细胞培养,几十种细胞转染经验,快速交付毫克或工业级蛋白,不成功不收费。

适用表达分泌蛋白,跨膜蛋白,酶类,离子通道等,蛋白结构接近天然状态,活性更高。
酵母表达系统


制定灵活的表达载体构建方案,优化筛选分泌型表达载体(pPIC9、pHIL-S1、pPICZa)与宿主菌株,包括Mut+、Muts

适用于表达真核蛋白、分泌蛋白、某些胞质定位且无糖基化修饰蛋白等。
昆虫表达系统

昆虫表达系统
(Insect)


根据蛋白性质选择胞内表达或分泌表达,筛选高效融合载体与表达细胞,确定最优表达量的表达条件。

适用于表达高等真核生物蛋白、分泌蛋白、多元蛋白复合物等。

重组表达案例

案例一

案例概况:表达的目的蛋白分子量在10kD左右,利用大肠杆菌表达系统进行表达。实验的难点为蛋白需要无标签表达纯化,纯化难度较大;同时由于下游应用的特殊性,需要去除蛋白质中的DNA。

目的蛋白纯化图
DNA检测结果

Fig1 :目的蛋白纯化图
Fig2:DNA检测结果

德泰通过查阅大量文献及多次纯化条件摸索,最终成功纯化得到目的蛋白,纯度>90%。经琼脂糖凝胶电泳检测,无DNA残留。

案例二

案例概况:该案例中目的蛋白为聚体蛋白(蛋白的活性结构以四聚体形式存在),客户采用哺乳动物瞬转的方法表达该蛋白,在表达时遇到了转染效率低、蛋白表达水平低,细胞培养上清中无法检测到四聚体等问题。在实验失败后,客户找到德泰生物。
公司接手该项目之后,对基因序列、表达载体与宿主细胞进行优化,提高蛋白表达水平。同时对转染方法进行优化,优化后转染效率明显提高。

转染方法优化前与优化后转染效率对比

Fig3:转染方法优化前(左)与优化后(右)转染效率对比

采用亲和纯化的方法进行目的蛋白的纯化,层析过柱之后,在还原和非还原状态下分别对上清洗脱组分进行电泳,证实细胞培养上清中确实存在该聚体蛋白。最终通过亲和纯化,成功纯化得到该聚体蛋白。

还原状态与非还原状态上清洗脱组分电泳图

Fig4:还原状态(lane 3)与非还原状态(lane 4)上清洗脱组分电泳图

附录:重组蛋白表达系统对比表

特点大肠杆菌酵母昆虫细胞哺乳动物细胞
生产周期4~6周~9周~9周7~9周
价格+++++++++
表达水平高(>50%)低-高(>10%)低-高(>20%)低-高(>30%)
蛋白质折叠部分折叠不完全正确折叠正确折叠正确折叠
规模化生产+++++++++
翻译后修饰磷酸化
乙酰化
酰胺化
γ-羧基
糖基化
 
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