德泰生物致力于为客户提供高纯度、低成本的活性重组蛋白,包括各类受体、细胞因子、生长因子、转录因子、激素、酶、毒性蛋白、病毒抗原等,满足客户下游科研实验研究的需求。德泰拥有先进的蛋白表达技术及丰富的蛋白表达经验,完成了多种正常条件下不表达、难表达、表达量低的蛋白的制备。
迄今为止,德泰共交付10000+组重组蛋白(各类野生型蛋白及突变型蛋白)。交付的蛋白被用于抗体制备、ELISA、IHC、药物研究、动物实验、晶体结构分析、体外酶活测定、细胞实验等下游实验。
重组蛋白有很多的应用,包括抗原制备,蛋白相互作用,酶学分析,及药物靶点研究。选择合适的蛋白表达系统,对下游蛋白的应用有重要影响。蛋白功能,产率,成本是优先考虑的几个因素。德泰为您提供多个重组蛋白表达系统,满足您的不同需求。
案例概况:表达的目的蛋白分子量在10kD左右,利用大肠杆菌表达系统进行表达。实验的难点为蛋白需要无标签表达纯化,纯化难度较大;同时由于下游应用的特殊性,需要去除蛋白质中的DNA。
德泰通过查阅大量文献及多次纯化条件摸索,最终成功纯化得到目的蛋白,纯度>90%。经琼脂糖凝胶电泳检测,无DNA残留。
案例概况:该案例中目的蛋白为聚体蛋白(蛋白的活性结构以四聚体形式存在),客户采用哺乳动物瞬转的方法表达该蛋白,在表达时遇到了转染效率低、蛋白表达水平低,细胞培养上清中无法检测到四聚体等问题。在实验失败后,客户找到德泰生物。
公司接手该项目之后,对基因序列、表达载体与宿主细胞进行优化,提高蛋白表达水平。同时对转染方法进行优化,优化后转染效率明显提高。
采用亲和纯化的方法进行目的蛋白的纯化,层析过柱之后,在还原和非还原状态下分别对上清洗脱组分进行电泳,证实细胞培养上清中确实存在该聚体蛋白。最终通过亲和纯化,成功纯化得到该聚体蛋白。
特点 | 大肠杆菌 | 酵母 | 昆虫细胞 | 哺乳动物细胞 | |
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生产周期 | 4~6周 | ~9周 | ~9周 | 7~9周 | |
价格 | + | ++ | +++ | +++ | |
表达水平 | 高(>50%) | 低-高(>10%) | 低-高(>20%) | 低-高(>30%) | |
蛋白质折叠 | 部分折叠 | 不完全正确折叠 | 正确折叠 | 正确折叠 | |
规模化生产 | +++ | ++ | ++ | ++ | |
翻译后修饰 | 磷酸化 | 无 | 有 | 有 | 有 |
乙酰化 | 无 | 有 | 有 | 有 | |
酰胺化 | 无 | 无 | 无 | 有 | |
γ-羧基 | 无 | 有 | 有 | 有 | |
糖基化 | 无 | 有 | 有 | 有 |
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