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TEV蛋白酶

TEV蛋白酶(TEV Protease)是一种用来切除融合蛋白上亲和标签的常用工具酶,具有很强的位点特异性,严格识别七肽序列EXXYXQ↓(G/S),切割位点在谷氨酰胺和甘氨酸/丝氨酸之间。普遍应用的七肽序列为:Glu-Asn-Leu-Tyr-Phe-Gln↓-Gly。可把His、MBP或GST等标签设计在融合蛋白的N端,并在标签与目的蛋白之间设计加入上述七肽序列,在His、MBP或GST标签被酶切后,在目的蛋白的N端仅有一个额外的Gly/Ser氨基酸残基,从而最大限度地减少了对目的蛋白结构和功能的影响。TEV蛋白酶在pH 7.0,30℃时可达到最佳活性,且在pH 6.0-8.5和温度4-30℃的广泛范围内皆有活性,使得反应条件的选择可根据目的蛋白的情况而灵活变动。

TEV-Protease

德泰生物TEV蛋白酶为使用E.coli表达经亲和纯化的重组蛋白酶,带有多聚His标签,便于融合蛋白切割后利用亲和层析去除蛋白酶。

产品应用

融合蛋白标签剪切去除。

活性定义

在 1×TEV Protease Buffer(50 mM Tris,pH 8.0,0.1 mM EDTA,1 mM DTT)中,30℃ 反应 1 h,剪切>85%的3 μg底物所需要的酶量定义为一个活性单位。

产品规格

产品名称货号规格说明书
TEV蛋白酶(His-tag)
(5 U/μL)
DTE051000 U下载
2000 U

保存条件

-80℃条件下可保存2年;-20°C条件下可保存6个月;避免反复冻融。

使用说明

1. 酶切条件

推荐4℃酶切过夜,用户可以根据自己的目的蛋白进行摸索最佳酶切条件。

2. 酶切条件的优化

由于不同目的蛋白具有不同的特性,所以在实际使用时,建议对酶和目的蛋白的比例进行适当优化。

a. 将反应混合物放置于30°C反应1小时。如果目的蛋白在30°C不稳定,可以考虑4°C反应过夜(16小时左右)。

b. 取20 μL样品进行SDS-PAGE电泳分析,确定反应所需的合适酶量和合适的反应时间。

TEV-Protease-case

Lane1:纯化的融合蛋白X

Lane2:纯化的TEV蛋白酶

Lane3-6:TEV蛋白酶的用量从左至右依次为0.25U、0.5U、1U、2U,30ºC酶切反应1 h,取样进行SDS-PAGE电泳

Lane7:Lane6酶切条件放大,酶切后样品与Ni-NTA Resin结合后的流穿

TEV酶切及镍柱回收参考图

注意事项

1. TEV蛋白酶的最佳酶切温度是30ºC,在实际操作过程中,为尽量保留目的蛋白的结构和生物活性,可以在4ºC用TEV 蛋白酶酶切过夜。TEV 蛋白酶在pH 6.0-9.0范围内具有活性,而当pH小于或等于5时,会失去酶活性。

2. TEV蛋白酶还有一个突出的优点是在400 mM咪唑中仍有较高活力,因此对于很多用镍柱纯化的His标签目的蛋白,可直接将TEV蛋白酶加入含高浓度咪唑的刚刚纯化的目的蛋白溶液中,在4ºC边透析去除咪唑边进行酶切。当然也可以在透析后再用TEV 蛋白酶进行酶切以去除His标签。经过酶切的目的蛋白,溶液中带有His标签的TEV 蛋白酶以及切除下来的His标签,都可以通过与镍柱结合而去除。

3. TEV蛋白酶的酶活性不会被常见的丝氨酸蛋白酶抑制剂(serine proteinase inhibitor),如PMSF、AEBSF、Bestatin、Pepstatin、E-64、TLCK和EDTA所抑制。但靶向半胱氨酸(Cysteine)残基的蛋白酶抑制剂如NEM或IAA等,可以显著抑制TEV蛋白酶的酶活力,因为天然的TEV蛋白酶含有其维持酶活力所必需的Cys151。

4. 本产品仅适用于科研用途。

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