德泰专注蛋白表达,可根据您的检测要求,定制蛋白
丰富的小分子数据库资源,查找/筛选相互作用小分子
可以检测体外/体内,弱/强,瞬时/稳定蛋白相互作用
以下主要介绍了德泰蛋白相互作用检测的三种方法:Fortebio Octet ,免疫共沉淀CO-IP,GST pull-down。每种方法有其适用性,可根据实验要求选择。
Octet® RED96系统是由ForteBio公司生产的全自动测试平台,该系统利用生物膜层光学干涉技术,只需微量样品,无需纯化,即可对分子间相互作用进行定性和定量的分析。包括对多个已知或未知蛋白的相互作用力进行排序,鉴定其是否存在蛋白互作等。Fortebio octet检测灵敏度较高并能够测得实时的分析结果,因此可以检测弱亲和力的相互作用和瞬时相互作用。
免疫共沉淀是检测蛋白相互作用的常用方法。以抗原抗体间的特异性为基础,特异性抗体从细胞抽提物中分离目的蛋白和相互作用蛋白的复合物,之后通过Western blot及质谱法确定相互作用蛋白。CO-IP既可以鉴定已知两个蛋白在体内的相互作用,也可以筛选未知的相互作用蛋白,但都无法进行相互作用的定量分析,同时CO-IP的灵敏度较低,检测不到蛋白间的弱相互作用和瞬时相互作用,且实验的假阳性率较高,设置正确的对照十分重要。
GST融合蛋白沉降技术(GST pull down)利用了GST对谷胱甘肽偶联球珠的亲和性,从非相互作用蛋白的溶液中纯化相互作用蛋白。该法可以鉴定与已知蛋白相互作用的未知蛋白,也可鉴定两个已知蛋白间是否存在相互作用。GST pull down的成功应用取决于是否有足够多并保持可溶性的GST重组融合蛋白,德泰生物提供可溶性蛋白表达服务,并承诺不成功零收费。
1.如何选择分子间相互作用检测方法?
技术 | SPR | BLI | CO-IP | GST pull-down |
---|---|---|---|---|
原理 | 表面等离子共振技术 | 生物膜层光学干涉技术 | 抗原抗体反应的特异性 | GST对谷胱甘肽偶联球珠的特异性 |
筛选互作蛋白 | √ | X | √ | √ |
验证互作蛋白 | √ | √ | √ | √ |
瞬时相互作用 | √ | X | X | X |
弱亲和力检测 | √ | √ | X | X |
定量分析 | √ | √ | X | X |
定性分析 | √ | √ | √ | √ |
2.德泰生物的分子间相互作用检测服务优势?
随着生命科学研究的不断发展,人们逐渐意识到基因组信息已经不能完全解释和预测各种生命过程及现象,而蛋白质作为细胞活性和功能的执行者,越来越受到人们的关注。然而,蛋白质功能的发挥不是凭借单个蛋白质独立执行,而是依靠蛋白质与蛋白质相互作用(protein-protein interaction, PPI)执行其功能。因此,蛋白质相互作用出现异常将会影响细胞活性和功能的发挥,从而引发许多疾病,如神经退行性疾病、癌症等。抑制这些异常的蛋白质相互作用对临床治疗具有重要意义。
检测范围 | 检测方法 |
---|---|
In vivo体内 | 免疫共沉淀(Co-IP) |
荧光共振能量转移(FRET) | |
邻近蛋白标记BioID | |
酵母双杂交(Yeast Two-hybrid) | |
In vitro体外 | 融合蛋白沉降技术(GSTPull down) |
Far-Western | |
表面等离子共振(SPR) | |
TAP串联亲和纯化技术 | |
蛋白质芯片技术(Protein microarrays) |
该技术是研究蛋白相互作用的经典技术,应用广泛且可信度较高。它利用特异性抗体从细胞抽提物中分离目的蛋白和相互作用蛋白的复合物,之后通过Western blot及质谱法确定相互作用蛋白。如果在非变性的条件下裂解细胞,蛋白间相互作用可以保持,所以就可利用免疫共沉淀方法找出相互作用的蛋白质。免疫共沉淀既可以用于检验已知的两个蛋白质在体内的相互作用,也可以找出未知的蛋白相互作用。
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