高保真PCR预混液

产品名称	2× PCR Master Mix
产品货号	DTE02
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产品详情
使用说明书

产品描述

德泰生物高保真PCR预混液（2×PCR Master Mix)为2×浓度的PCR混合液，其除了含有PCR扩增常用的dNTP和Mg²⁺之外，还含有一种基于基因工程改造的新一代高保真酶，其具有极高的扩增效率和高保真性，同时增加的特殊扩增促进剂也使扩增效果进一步增加。此酶具有5’→3’DNA聚合酶活性以及3’→5’外切酶活性，扩增产物为平末端，可用于后续同源重组等试验。

产品应用

本品适用于以基因组DNA、cDNA、质粒等模板的PCR反应

产品优势

保真度高
特异性高
得率高

反应体系

组分	体积/μL
ddH₂O	Up to 50
2× PCR Master Mix	25
模板	X
正向引物(10 μM)	1
反向引物(10 μM)	1

注：
1.使用前请于冰上融化，震荡瞬时离心。
2.模板推荐量基因组DNA：50~150ng；质粒：5~50ng；cDNA：1~5μL（不超过反应体积的1/10）。

反应程序

程序	温度/℃	时间	循环数
预变性	95	3 min	1
变性	95	15 s	35
退火^a	根据引物而定	15 s
延伸^b	72	15 s
延伸	72	5 min	1
保存	4	∞	1

a.退火温度：一般设置为引物Tm值±3℃左右即可。
b.延伸时间：一般模板设置为15s/kb，对于一些困难模板，可延伸至20~30s/kb范围之间调整。

反应程序

常见问题	可能原因	解决方法
无扩增产物或产物量少	引物	重新设计优化引物
	退火温度	设置梯度，寻找合适退火温度
	引物浓度	适当提高引物浓度
	延伸时间	适当提高延伸时间
	循环数	适当提高循环数
	模板	适当增加模板量或提高模板纯度
条带弥散或有杂带	引物	重新设计优化引物或适当降低引物浓度
	退火温度	适当提高退火温度并寻找最适温度
	延伸时间	根据杂带大小而定，大于目的片段降低，小于目的片段提高延伸时间
	循环数	适当降低循环数
	模板	使用纯度高的模板或适当降低模板量