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SUMO蛋白酶

SUMO融合体系具有促进可溶性表达、促进蛋白质正确折叠、保护蛋白质免受蛋白酶水解的作用,且SUMO蛋白酶(SUMO Protease)的特异性识别切割,可以完全去除SUMO标签,最大限度地减少了对目的蛋白结构和功能的影响。

德泰生物SUMO蛋白酶为使用E.coli表达经亲和纯化的重组蛋白酶,带有多聚His标签,便于融合蛋白切割后利用亲和层析去除蛋白酶。

SUMO-workflow

使用SUMO标签进行蛋白表达流程

产品应用

融合蛋白SUMO标签剪切去除。

活性定义

在1×SUMO Protease Buffer(50 mM Tris-HCl, pH 8.0, 1 mM DTT)中,30°C反应1h,剪切>85%的2 μg对照底物所需要的酶量定义为一个活性单位。

产品规格

产品名称货号规格说明书
SUMO蛋白酶(His-tag)
(5 U/μL)
DTE011000 U下载
2000 U

保存条件

-80℃条件下可保存2年;-20°C条件下可保存6个月;避免反复冻融。

使用说明

1. 酶切条件

推荐4℃酶切过夜,使用者可以根据自己研究的目的蛋白进行摸索。

2. 酶切条件的优化

由于不同目的蛋白具有不同的特性,所以在实际使用时,建议对酶和待酶切的目的蛋白的比例进行适当优化。以下是一个简单的估计酶用量的实验方案。

a. 将反应混合物放置于30℃反应1 h。如果目的蛋白在30℃不稳定,可以考虑4℃反应过夜(16 h左右)。

b. 带有SUMO标签的目的蛋白酶切反应的温度与时间,可以视情况进行适当调整,具体参考如下表格。

反应温度反应时间
4℃16 h
16℃4 h
1.5 h1000 U
30℃1 h

c. 取20 µL样品进行SDS-PAGE电泳分析,确定反应所需的合适酶量。在实际操作过程中,如果有必要,还可以在上述反应的不同时间点取少量样品,后续通过电泳分析来确定优化的反应时间。

SUMO-protease-case

Lane1:纯化的SUMO融合蛋白X 2µg

Lane2:纯化的SUMO蛋白酶 2µg

Lane3-6:SUMO蛋白酶的用量从左至右依次为0.25U、0.5U、1U、2U,30℃酶切反应1 h,取样进行SDS-PAGE电泳

Lane7:Lane6酶切条件放大,酶切后样品与Ni-NTA Resin结合后的流穿

SUMO酶切及镍柱回收参考图

3.酶切与纯化

后续可以按照上述优化的反应条件,放大反应体系进行目的蛋白SUMO标签的切除反应。反应结束后,可以通过镍柱结合去除切除下来的带有His标签的SUMO标签,以及带有His标签的本品,从而获得高纯度的无标签目的蛋白。

注意事项

1. 为达到最好的酶切效果,请保证重组蛋白为部分或完全纯化的蛋白。

2. 对于大部分融合蛋白,SUMO蛋白酶所需NaCl的浓度不同的蛋白情况会有所差别,可根据实际情况在0~300 mM之间调节NaCl的浓度以达到最佳的效果。

3. 反应体系中咪唑的浓度应低于150 mM,否则SUMO蛋白酶的活性会受到抑制。

4. 本产品仅适用于科研用途。

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