2×One Step Cloning Mix是一种简单、快速并且高效的DNA无缝克隆产品，可将插入片段定向克隆至载体的任意位点。在插入片段正向/反向PCR引物5’端分别引入线性化后载体的末端序列，使得PCR产物5’和3’最末端分别带有和线性化载体两末端一致的序列（20-40 bp）。PCR产物和线性化载体按一定比例混合后，在重组酶的催化下，50℃反应30 min后即可进行转化，完成定向克隆。高度优化的反应缓冲液及增强的重组酶体系，使得阳性率可达95%以上。
| 组分 | 货号 | 规格 |
|---|---|---|
| 2×One Step Cloning Mix | DTE06 | 25rxns/50rxns |
| 阳性对照线性化载体和1个DNA片段 | / | 10μl/20μl |
快速克隆、无缝克隆、定点突变等。
| 组分 | 体积（μl） |
|---|---|
| 线性化载体 | 50-100ng |
| PCR产物 | X |
| 2×One Step Cloning Mix | 10.0 |
| RNase-Free water | 补至20 |
| 总体积 | 20.0 |
1）将线性化载体，2×One Step Cloning Mix从-20℃冰箱中取出，冰上融化，待完全融化后，移液器吹打混匀，瞬时离心。按照反应体系配制（目的片段与载体的摩尔比建议在2∶1-3∶1之间）。
2）移液器吹打混匀（请勿震荡混匀），瞬时离心；
3）将反应管置于PCR仪中进行反应，50℃孵育30分钟，降至4℃或立即置于冰上冷却。
4）冰上融化-80℃保存的感受态细胞
5）取10.0μl连接产物，加入感受态细胞中，轻轻吹打混匀，立即冰浴5分钟。
6）提前将PCR仪预热至42℃，冰浴后放入PCR仪中，42℃热激90s。
7）反应结束后，立即取出，冰上冷却3-5分钟，备用。
8）加入灭菌无抗性的400μl 2×YT培养基，37℃培养70 分钟左右（摇床转速200-250rpm）。
9）将相应抗性的固体培养基平板在37℃培养箱中预热。
10）取100μl培养后细胞均匀的涂在平板上，后在37℃培养箱中倒置过夜培养（14-16h左右）。
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发货方式：冰袋或干冰。
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