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高保真PCR预混液

德泰生物高保真PCR预混液(2×PCR Master Mix)为2×浓度的PCR混合液,其除了含有PCR扩增常用的dNTP和Mg2+之外,还含有一种基于基因工程改造的新一代高保真酶,其具有极高的扩增效率和高保真性,同时增加的特殊扩增促进剂也使扩增效果进一步增加。此酶具有5’→3’DNA聚合酶活性以及3’→5’外切酶活性,扩增产物为平末端,可用于后续同源重组等试验。

产品应用

本品适用于以基因组DNA、cDNA、质粒等模板的PCR反应

产品优势

  • 保真度高
  • 特异性高
  • 得率高

产品概况

产品名称货号规格价格说明书
2× PCR Master MixDTE021 mL询价下载
10 mL

反应体系

组分体积/μL
ddH2OUp to 50
2× PCR Master Mix25
模板X
正向引物(10 μM)1
反向引物(10 μM)1

注:
1.使用前请于冰上融化,震荡瞬时离心。
2.模板推荐量基因组DNA:50~150ng;质粒:5~50ng;cDNA:1~5μL(不超过反应体积的1/10)。

反应程序

程序温度/℃时间循环数
预变性953 min1
变性9515 s35
退火a根据引物而定15 s
延伸b7215 s
延伸725 min1
保存41

a.退火温度:一般设置为引物Tm值±3℃左右即可。
b.延伸时间:一般模板设置为15s/kb,对于一些困难模板,可延伸至20~30s/kb范围之间调整。

反应程序

常见问题可能原因解决方法
无扩增产物或产物量少引物重新设计优化引物
退火温度设置梯度,寻找合适退火温度
引物浓度适当提高引物浓度
延伸时间适当提高延伸时间
循环数适当提高循环数
模板适当增加模板量或提高模板纯度
条带弥散或有杂带引物重新设计优化引物或适当降低引物浓度
退火温度适当提高退火温度并寻找最适温度
延伸时间根据杂带大小而定,大于目的片段降低,小于目的片段提高延伸时间
循环数适当降低循环数
模板使用纯度高的模板或适当降低模板量

注意事项

  1. 请使用高质量模板。
  2. 避免反复冻融此产品,因为这会降低酶的活性。
  3. 此产品仅供科研使用,不适用于临床诊断或治疗。
  4. 请勿将此产品用于任何非法目的。

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