TMB底物液的主要成分是3,3′,5,5′-四甲基联苯胺（3,3′,5,5′-tetramethylbenzidine(TMB)），是辣根过氧化物酶（HRP）的底物，在辣根过氧化物酶的作用下，发生氧化反应生成蓝色产物，颜色的强弱与HRP的活性呈正比，从而可以用于基于HRP标记物的检测。
根据使用计划，将需要的TMB显色液从大瓶转移至干净的避光小瓶中，后续从小瓶中取用。
加液：加完HRP结合物并温育一定时间后，洗板3-5次，每孔加TMB显色液100ul-200ul。根据实验需要，在室温（15-25°C）或37°C下温育10-30分钟。
终止：加50微升终止液(1M盐酸或硫酸溶液)终止反应，孔中反应液由蓝色变为黄色。
读数：终止反应后30分钟内在450nm处读数。
注意：如果出现高的反应背景或沉淀，表明TMB底物反应过于强烈。为了避免产生沉淀，可在终止后马上读数,或者进一步稀释一抗或HRP结合物。
常温运输（勿超过30°C），2-8°C避光储存12个月。
1.适用于HRP标记的ELISA实验，该底物中含TMB和过氧化氢，在HRP的作用下，被氧化形成水溶性蓝色产物，在370 nm和650 nm有吸收峰。进行动力学实验时，可直接检测650 nm的吸光度。由于蓝色会不断加深，推荐及时加入终止液，加入酸性终止液后溶液变成稳定的黄色，检测波长为450 nm，吸光度值可较不终止增加数倍且保持稳定。
2.该底物对微量的HRP酶敏感，在使用过程中应避免污染，切忌将枪头直接插入大瓶中取液。一旦未使用的显色液变蓝了，说明试剂遭到污染，需停止使用。
3.操作过程中避免阳光的直射，分装的容器建议用塑料容器，避免使用金属容器以及细菌和氧化还原剂污染的容器。
4.大量分装时最好使用称重的方法或蠕动泵。
5.过高浓度的HRP会导致TMB呈现绿色或红色，或终止后出现沉淀，应该减少抗体和标记物的用量或缩短孵育时间。
南京德泰生物工程有限公司 Nanjing Detai Bioengineering Co.,Ltd. ©2025 All Rights Reserved
苏公网安备32011202001300