原核蛋白表达系统

蛋白是生命活动功能执行最重要的大分子,只有具有正确结构和功能的重组蛋白才能进行相关生命科学研究。蛋白的应用主要有:作为抗原制备抗体;参与细胞实验与动物实验;测定蛋白酶活;研究蛋白相互作用(免疫共沉淀,GST pull down);蛋白结晶结构研究,免疫组化实验等等,不同的应用对于蛋白的要求也互不相同。在进行蛋白表达时,通常要考虑以下几点:

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德泰生物提供原核蛋白表达服务。德泰专注重组蛋白表达十余载,形成了多项技术优势:密码子优化及mRNA结构优化上清表达优化、蛋白复性技术、内毒素去除技术及高密度发酵技术。同时首选His(0.84kd)最短标签,避免采用大标签,对蛋白造成结构或功能的影响。

原核蛋白表达

原核蛋白表达服务之可溶保证型服务
可溶性原核蛋白表达
客户提供蛋白序列,德泰提供优化及基因合成,并保证获得可溶性蛋白。
分子间相互作用
分子间相互作用检测
研究蛋白/抗原/抗体相互作用力,亲和力定量定性分析,抗原表位分析服务。
原核表达服务之上清优化服务
蛋白表达上清优化
条件矩阵优化,提高上清表达率,交付上清蛋白。
蛋白纯化服务
蛋白纯化服务
多重纯化方法选择,更易获取活性蛋白。
原核蛋白表达服务之大规模制备服务
发酵及大规模制备服务
高密度发酵技术,适合工业级蛋白大量生产,同时可进行工艺流程优化。
原核蛋白表达服务之表达检测技术服务
质粒表达检测服务
客户提供质粒, 德泰摸索并优化基因表达条件并提供蛋白表达报告。

原核系统

原核表达系统是通过原核生物来获得外源蛋白的体系,主要包括:大肠杆菌表达、枯草芽孢杆菌表达、链霉菌表达等,其中大肠杆菌系统应用最为广泛,一般所说的原核系统主要是指大肠杆菌表达,其表达原理为:Lac阻遏物是一种具有4个相同亚基的四级结构蛋白,都有一个与诱导剂结合的位点。在没有乳糖存在时,lac操纵子(元)处于阻遏状态,Lac阻遏物能与操纵基因O结合,阻碍RNA聚合酶与P序列结合,抑制转录起动。而当有诱导剂与阻遏蛋白结合后,其蛋白构象就发生变化,导致阻遏物从操纵基因O上解离下来,RNA聚合酶不再受阻碍,发生转录。

和真核表达相比,原核表达系统宿主菌生长快,培养简单,操作方便,价格低廉,蛋白表达量高;但由于缺乏转录后加工机制,不能对蛋白进行加工修饰。

枯草芽孢杆菌原核表达

枯草芽孢杆菌表达系统

枯草芽孢杆菌原核表达

链霉菌表达系统

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原核表达FAQ

原核表达(这里是指大肠杆菌表达系统)是目前常用的重组蛋白表达方式之一,操作相对简便,要求较低。相对哺乳动物表达系统更加经济节约。但是也常常遇到一些问题,比如原核表达蛋白表达量低?蛋白不表达?蛋白表达不在上清易形成包涵体等情况,本文主要根据实验经验总结原核蛋白表达的两个问题蛋白为什么不表达和蛋白表达为什么不在上清,并提出针对性的解决方案,帮助我们提高实验的成功率。

蛋白表达为什么不在上清?

大肠杆菌的表达部位通常在细胞质中,细胞周质中,细胞外。
周质中表达的蛋白质,分离纯化简单,而且周质中的氧化环境有利于蛋白质的正确折叠,但是蛋白产量很低
胞内表达是外源蛋白在大肠杆菌中主要的表达形式,但是由于大肠杆菌的细胞质环境呈现还原性,不利于蛋白二硫键的形成和稳定,从而导致蛋白的不准确折叠,形成不溶性的包涵体… 更多

如何提高蛋白可溶性?

可溶性策略
  • 选择合适的宿主细胞
  • 采用融合标签表达
  • 选择合适的质粒载体
  • 分泌型表达
  • 优化培养条件

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