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单抗制备 杂交瘤测序 蛋白表达

重组IgG

免疫球蛋白是由B淋巴细胞产生分泌到血浆中的。以单体的形式存在,形状类似于“Y”的结构,分子量约150kDa。免疫球蛋白可以分为IgG、IgA、IgD、IgM、IgE五类。
Ig分子的结构包括两个二硫键连接的两半相同的糖蛋白,由两条相同的50kDa的重链和25kDa的轻链组成,通过在轻链羧基末端附近的二硫键连接在一起。IgG抗体结构
碳水化合物连接到抗体分子的Fc端,Fc区含有所有的免疫球蛋白共有的蛋白质序列及各个类别独有的决定簇,且在相同类别的不同Ig分子上没有显著变化,所以Fc端称为恒定区。
IgG和IgM的Fc端可以结合免疫调节细胞表面的受体,并刺激相应细胞因子的释放。Ig分子的Fab端包含通过两个二硫键连接在一起的重链和轻链。一条重链和一条轻链对结合形成抗体的抗原结合位点,每个Ig分子可以结合两个抗原分子。

重组抗体制备服务
人源和鼠源的Ig分子对比:

人源IgG鼠源IgG
属性IgGIgG
重链类γγ
重链子类γ1γ2γ3γ4γ1γ2aγ2bγ3
轻链MW23kDa23kDa23kDa23kDa约95% KLC – 5% γLC
总MW150kDa150kDa170kDa150kDa160kDa
Fc受体结合None
补体固定没有可以

表1:人鼠IgG及其亚型对比

人源Ig分子鼠源Ig分子
属性IgDIgEIgDIgE
重链类δεδε
重链MW62kDa70kDaNone
轻链MW23kDa23kDa约95% KLC – 5% γLC
总MW180kDa190kDa180kDa190kDa
Fc受体结合NoYesNo
补体固定NoNo未知

表2:人鼠IgD/IgE对比

不同亚型Ig分子结构对比图:
不同亚型Ig结构对比

德泰重组IgG抗体的表达纯化

德泰生物利用哺乳动物细胞瞬时转染表达生产重组IgG抗体:

  • IgG基因合成:通过基因合成,获得基因序列,将基因序列克隆到德泰proEM高表达载体上;
  • IgG抗体表达:利用哺乳动物细胞(CHO/HEK293细胞),表达重组IgG。通过特定的转染方法,将质粒转入到细胞内,进行快速表达;
  • 重组IgG纯化:使用protein A/G纯化,抗原亲和纯化,通过SDS-PAGE、Western Blot质谱等方法进行检测,我们保证纯度>90%。