重组蛋白流程优化服务

南京德泰生物的流程优化服务是原核蛋白表达服务平台的重要组成。它可以为您的重组蛋白交付优化的表达及纯化方案,用以满足活性及大量制备的要求。

服务内容

步骤 周期 交付 费用
基因合成及亚克隆 项目方案设计 2~3weeks 实验报告(包括:密码子优化、载体-宿主菌的优化、表达条件优化) 询价
密码子优化
基因合成
克隆至载体
蛋白表达 转化 1~2weeks
表达条件优化及鉴定
放大表达
蛋白纯化 上清、包涵体纯化条件优化 1~2weeks
蛋白复性条件优化

密码子优化

密码子优化是蛋白表达优化的重要步骤之一,在蛋白表达过程中,通常我们都会考虑表达载体和宿主系统是否为最佳条件,却往往忽视了基因本身是否与载体或宿主菌是最佳匹配这一实质性的问题。

由于密码子的使用偏好性不同,当在不同物种上进行表达时,往往得不到很好的结果。针对这一难题,我们在不改变蛋白性质的前提下,对您的基因进行优化,目的在于表达出尽可能接近天然构象的重组蛋白质。重组蛋白表达的关键要素包括基因、载体、表达宿主、表达培养条件。这些要素之间相互影响,为了更好地达到优化的目的,需将目标放到其所在上下文中进行优化。优化的设计点可以从基因合成、载体构建、基因转录、mRNA翻译等过程中提取,如下:

密码子优化指标

密码子优化案列

蛋白:mIL9 载体:pET30a 宿主菌:Bl21

如图,对目标蛋白mIL9进行密码子优化与未优化的表达结果,15℃条件下,都没有表达,37℃条件下,经过密码子优化的mIL9蛋白在16kd处明显有条带(表达)。

密码子优化案例

载体、宿主菌优化

  种类 选择
载体 pET 我们有十五种载体和八种宿主菌可供选择,选择依据①目的蛋白的应用 ②目的蛋白已知特定信息等其他要求,尝试多种载体、宿主菌组合。
pGEX
其他
宿主菌 BL21(DE3)
Origami B
其他

蛋白表达条件优化

为了提高大肠杆菌的重组蛋白表达水平,抑制包涵体的生成我们选用特定表达菌株、采用与分子伴侣共表达、降低目标蛋白表达温度、调整诱导温度等手段优化,进行48种表达条件摸索,最终确定最佳组合。

表达条件优化矩阵

蛋白纯化条件优化

我们蛋白纯化常用的方法有:亲和层析、离子交换色谱、凝胶层析法。纯化因蛋白而异,采用不同的纯化策略。
针对包涵体,我们拥有自己独特的复性方法(复性服务),通过比对找到最佳的复性方法和最优的复性条件,保证提供的蛋白活性最佳。

纯化案例

以亲和层析为例,如图为不同浓度的洗脱液洗脱的SDS-PAGE图

纯化条件优化

询价与订购

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