分子间相互作用

蛋白间相互作用是生命现象发生的基础,研究其相互作用可以阐明生物反应的机理,揭示生命现象的本质。虽然有一些蛋白可以以单体的形式发挥作用,但是大部分的蛋白都是通过蛋白间相互作用或形成蛋白复合物来发挥作用的。近年来,研究分子相互作用的技术不断出现。德泰生物提供蛋白相互作用检测服务,包括Fortebio octet生物膜层光学干涉技术(BLI)、免疫共沉淀(CO-IP, Co-Immunoprecipitation)、GST pull-down等,能够实现对蛋白,小分子,抗体及Fab片段等相互作用的定性定量分析。

蛋白相互作用检测服务

Fortebio Octet
  • 生物膜层光学干涉(BLI)
  • 蛋白互作定性/定量分析
  • 瞬时/稳定蛋白相互作用

免疫共沉淀
  • 抗原抗体反应特异性
  • 蛋白互作定性分析
  • 体内相互作用检测

GST pull-down
  • GST-GSH偶联球珠特异性
  • 蛋白互作定性分析
  • 体外相互作用检测

服务优势:

德泰专注蛋白表达,可根据您的检测要求,定制蛋白
丰富的小分子数据库资源,查找/筛选相互作用小分子
可以检测体外/体内,弱/强,瞬时/稳定蛋白相互作用

蛋白相互作用

以下主要介绍了德泰蛋白相互作用检测的三种方法:Fortebio Octet ,免疫共沉淀CO-IP,GST pull-down。每种方法有其适用性,可根据实验要求选择。

Fortebio octet

Octet® RED96系统是由ForteBio公司生产的全自动测试平台,该系统利用生物膜层光学干涉技术,只需微量样品,无需纯化,即可对分子间相互作用进行定性和定量的分析。包括对多个已知或未知蛋白的相互作用力进行排序,鉴定其是否存在蛋白互作等。Fortebio octet检测灵敏度较高并能够测得实时的分析结果,因此可以检测弱亲和力的相互作用和瞬时相互作用。

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免疫共沉淀 CO-IP

免疫共沉淀是检测蛋白相互作用的常用方法。以抗原抗体间的特异性为基础,特异性抗体从细胞抽提物中分离目的蛋白和相互作用蛋白的复合物,免疫共沉淀之后通过Western blot及质谱法确定相互作用蛋白。CO-IP既可以鉴定已知两个蛋白在体内的相互作用,也可以筛选未知的相互作用蛋白,但都无法进行相互作用的定量分析,同时CO-IP的灵敏度较低,检测不到蛋白间的弱相互作用和瞬时相互作用,且实验的假阳性率较高,设置正确的对照十分重要。

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GST pull-down

GST融合蛋白沉降技术(GST pull down)利用了GST对谷胱甘肽偶联球珠的亲和性,从非相互作用蛋白的溶液中纯化相互作用蛋白。该法可以鉴定与已知蛋白相互作用的未知蛋白,也可鉴定两个已知蛋白间是否存在相互作用。GST pull down的成功应用取决于是否有足够多并保持可溶性的GST重组融合蛋白,德泰生物提供可溶性蛋白表达保证服务,并承诺不成功零收费。

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蛋白相互作用FAQ

1.如何选择分子间相互作用检测方法?

技术 Fortebio octet CO-IP GST pull-down
原理 生物膜层光学干涉技术 (BLI) 抗原抗体反应的特异性 GST对谷胱甘肽偶联球珠的特异性
筛选互作蛋白 X
验证互作蛋白
瞬时相互作用 X X X
弱亲和力检测 X X
定量分析 X X
定性分析

2.德泰的分子间相互作用检测服务优势?

  • 德泰可以提供样品制备到蛋白互作检测一站式服务,包括蛋白,抗原抗体等。我们可以提供原核表达或哺乳动物系统制备重组蛋白,可以根据您的检测要求加上特定的标签。您可以选择德泰的原核可溶性保证服务制备蛋白,我们承诺不成功,零收费;
  • Fortebio octet,灵敏度高,测得弱亲和力相互作用;实时监控,测得瞬时相互作用;实验可获得详细数据,可对蛋白相互作用进行定量分析,和不同蛋白间的相互作用力进行排序;
  • CO-IP,GST pull down用于对分子间相互作用定性分析,包括鉴定已知两个蛋白是否存在相互作用,筛选与已知蛋白互作的未知蛋白;
  • 小分子库资源:专业技术人员查找资源,在您不确定相互作用小分子的情况下,我们可以在数据库中进行查找筛选;

3.什么是Fortebio octet生物膜干涉技术?

  Octet® RED96系统是由ForteBio公司生产的全自动测试平台,可用于测量蛋白与分子间的相互作用。该系统基于光纤生物传感器的生物膜层光学干涉技术,可测定生物分子间相互作用的实时分析结果。

Fortebio octet案例介绍
分子间相互作用

蛋白相互作用检测方法综述

随着生命科学研究的不断发展,人们逐渐意识到基因组信息已经不能完全解释和预测各种生命过程及现象,而蛋白质作为细胞活性和功能的执行者,越来越受到人们的关注。然而,蛋白质功能的发挥不是凭借单个蛋白质独立执行,而是依靠蛋白质与蛋白质相互作用(protein-protein interaction, PPI)执行其功能。因此,蛋白质相互作用出现异常将会影响细胞活性和功能的发挥,从而引发许多疾病,如神经退行性疾病、癌症等。抑制这些异常的蛋白质相互作用对临床治疗具有重要意义。

检测范围 检测方法
In vivo体内 免疫共沉淀(Co-PI)
荧光共振能量转移(FRET)
邻近蛋白标记BioID
酵母双杂交(Yeast Two-hybrid)
In vitro体外 融合蛋白沉降技术(GSTPull down)
Far-Western
表面等离子共振(SPR)
TAP串联亲和纯化技术
蛋白质芯片技术(Protein microarrays)

免疫共沉淀

该技术是研究蛋白相互作用的经典技术,应用广泛且可信度较高。它利用特异性抗体从细胞抽提物中分离目的蛋白和相互作用蛋白的复合物,之后通过Western blot及质谱法确定相互作用蛋白。如果在非变性的条件下裂解细胞,蛋白间相互作用可以保持,所以就可利用免疫共沉淀方法找出相互作用的蛋白质。免疫共沉淀既可以用于检验已知的两个蛋白质在体内的相互作用,也可以找出未知的蛋白相互作用。

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