蛋白纯化

德泰生物可以提供大规模蛋白纯化、融合标签蛋白纯化、无标签蛋白纯化等多种蛋白纯化技术服务。同时也提供蛋白纯化树脂及预装柱。我们提供的详细蛋白纯化服务有:

重组蛋白纯化

德泰可提供多种蛋白纯化服务,满足客户的不同需求,如需要无标签的纯化蛋白用于结构分析,需要将自然界获取的天然蛋白纯化,需要克级或千克级以上的可溶性蛋白等。具体服务内容如下:

可溶蛋白纯化服务
可溶性蛋白表达纯化
客户提供蛋白序列,德泰优化及基因合成,表达纯化获得可溶性蛋白
无标签蛋白纯化服务
无标签蛋白服务
全面分析蛋白性质,结合分子筛、离子柱、疏水色谱,综合制定纯化方案
内毒素去除及检测
内毒素去除与检测
内毒素定性和半定量分析,交付低内毒素重组蛋白
抗体纯化服务
抗体纯化
重组抗体纯化,及单抗多抗纯化,最终交付>90%纯度抗体
大规模蛋白表达纯化服务
大规模蛋白表达纯化
高密度发酵技术,适合工业级蛋白大量生产,同时可进行工艺流程优化。
蛋白复性服务
蛋白复性
根据大肠杆菌密码子组成优化基因序列,提高表达成功率。

蛋白纯化服务优势

先进的AKTA纯化系统和全套预装纯化柱,适合纯化不同来源的重组蛋白或天然蛋白多种蛋白纯化系统(亲和色谱、离子交换、分子筛、疏水色谱、HPLC等)提供全面的蛋白纯化分析报告和蛋白质量检测报告。
蛋白纯化实验流程:
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蛋白纯化方法

我们的纯化策略侧重于在提高蛋白纯度的同时减少蛋白表达量的损失。因此我们常采用多种纯化方式混合纯化的方法,常用的纯化方法有:

纯化方法 简述
亲和纯化 利用目的蛋白与其特异性配体之间的亲和力分离蛋白
离子交换色谱法 将离子交换剂与目的蛋白的电荷结合,通过改变PH或增加离子强度的缓冲液洗脱目的蛋白
凝胶过滤色谱法 主要依据蛋白质分子量和分子形状进行分离
疏水色谱法 利用蛋白与疏水配体绑定的可逆作用进行分离纯化
高效液相色谱法 与传统的液相色谱柱相比,具有分离效能高,检测灵敏度高、分析速度快等优势

我们交付的蛋白默认保存在Tris缓冲液中,如果客户对蛋白保存条件有要求,我们还可提供其他缓冲液或冻干服务。

查看全文:蛋白纯化专题

亲和纯化技术

亲和纯化是利用待分离物质和它的特异性配体间的特异亲和力,达到分离目的的一类纯化技术。这里主要介绍His/GST亲和纯化原理和实验步骤(流程)。

凝胶过滤色谱(分子筛)纯化技术

凝胶过滤色谱又称分子筛,蛋白纯化方式之一。是应用蛋白质分子量或分子形状的差异去进行分离的一项纯化技术。

离子交换色谱

离子交换色谱是利用离子交换剂上的可交换离子与周围介质中被分离的各种离子间的亲和力不同,经过交换平衡达到分离目的的一种纯化方法。

蛋白纯化标签选择

蛋白表达纯化时标签的选择对蛋白会产生一定影响,如表达量,可溶性及蛋白的下游应用。本文主要分析了几种常用标签的优缺点和适用性。

蛋白纯化方法选择

蛋白纯化的方法主要有四种,选择合适的纯化方法有助于获得更好的蛋白,本文主要从蛋白的性质入手,指导实验选择合适的蛋白纯化方法。

蛋白纯化经验总结

蛋白纯化是蛋白表达实验中的重要一步,蛋白纯化有不少技术难点,本文主要是根据经验总结蛋白纯化的相关问题并提出解决方法。

蛋白纯化案例介绍

蛋白纯化案例

无标签蛋白多步纯化 – 目标蛋白 Protein V1 (~14.7Kd), 杂蛋白 (~10Kd)
Lane 1: 初步纯化后的目标蛋白与杂蛋白,靠的很近
Lane 2 – 15: 经过离子柱,分子筛与疏水柱,多重纯化,目标蛋白被分离
该项目难点: 无标签蛋白,杂带与目的蛋白靠的很近

查看全文:蛋白纯化FAQ

蛋白表达为包涵体的情况并不少见,尤其是在大肠杆菌蛋白表达系统中,80%的蛋白都会形成包涵体。复性的难点在于复性条件的摸索与试剂的选用,德泰的蛋白复性服务会通过筛选多种复性条件,确保蛋白正确折叠,保证交付蛋白的可溶性。
如果客户的蛋白无法正常折叠,我们推荐选用上清优化型原核蛋白表达服务。该服务可以将目的蛋白表达在上清液里,能够获得更高的天然活性和纯度。

包涵体蛋白纯化,如何复性?

  1. 包涵体蛋白纯化方法一:透析复性
  2. >收集变性的A蛋白,将其浓度控制在x mg/ml,共计x ml,用离心机离心:13000r/min x 15min , 温度为4℃,离心结束后留上清。
  3. 将上清其装入已经预处理好的透析袋中(截留分子量为3.5KDa),将蛋白按照体积比为1/10至1/15透析至xml的复性缓冲液(氧化还原系统:GSH/GSSG)中,时间为x小时,温度为4℃。

包涵体蛋白纯化方法二:稀释复性

  1. 收集变性的x蛋白,将其浓度控制在x mg/ml,共计x ml,用离心机离心:13000r/min x 15min , 温度为4℃,离心结束后留上清。
  2. 将上清按终浓度为x mg/ml稀释至x ml复性缓冲液(氧化还原系统:GSH/GSSG)中,时间为x小时,温度为4℃。
  3. 稀释复性结束后,将含有蛋白的复性缓冲液离心:13000r/min x 15min , 温度为4℃,离心结束后留上清。
  4. 将上清通过xx层析的方法与X柱子结合,用非变性的洗脱缓冲液洗脱收集蛋白。
  5. 将符合要求的蛋白将其浓度控制在x mg/ml,共计x ml,用离心机离心:13000r/min x 15min , 温度为4℃,离心结束后留上清。
  6. 将上清其装入已经预处理好的透析袋中(截留分子量为3.5KDa),将蛋白按照体积比为1/10至1/15透析至xxml的储存缓冲液)中,时间为xx小时,每x小时换液一次,温度为4℃。
  7. 透析结束后,将蛋白取出离心:13000r/min x 15min , 温度为4℃,离心结束后留上清,并用滤头抽滤(直径为0.22um)后分装,并将其冻存至-80℃,(需要冻干的,再用冻干机冻干) 等待检测。

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