哺乳动物细胞表达原理

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本文主要讲述了哺乳动物细胞瞬时转染表达原理和稳定细胞系构建原理。

哺乳动物表达系统具有促使蛋白正确折叠和实现复杂修饰的功能,表达的蛋白更近天然状态,能够运用于制药等活性要求高的领域。与原核表达系统相比较,操作相对复杂,需要
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细胞房,环境要求严格。目前国内做表达动物细胞蛋白表达的公司多数为外包公司,细胞房的建立需要大量的资金及人员的投入,德泰拥有自己的细胞房和哺乳动物细胞蛋白表达团队,能够同时承担多个蛋白表达项目,服务周期质量有保证。

哺乳动物细胞按其表达方式主要分为两类:瞬时转染表达,稳定转染表达(稳定细胞系构建)。不同的表达方式原理不同,下面一一叙述:

瞬时转染表达

瞬时转染表达,顾名思义,在短时间内表达出一定量的蛋白。解释为:外源基因不整合到宿主染色体上,随着细胞的生长不断丢失,表达小量蛋白的过程。瞬时转染转染的时间一般在3-4天,即可收获到蛋白进行然后鉴定。具体如下:将构建好的质粒/载体,导入到培养好的哺乳动物细胞内(Hek293),通过合适的转染方法(参见细胞转染方法)将质粒导入到细胞内,质粒(环状)进入细胞体内不整合到宿主细胞自身的染色体组上,随着细胞的生长分裂,质粒逐渐丢失,在细胞生长分裂到质粒最终丢失的这一段时间,质粒在细胞中可进行短期表达,这就是瞬时转染表达。从其转染原理不难看出,瞬时转染存在偶然性(质粒导入到细胞的过程)因此蛋白的表达量也不高,这也是瞬时转染表达的缺点之一。

稳定转染/稳定细胞株筛选

稳定转染即稳定细胞系构建,与瞬时转染有类似之处。将构建好的质粒线性化,在导入到培养好的哺乳动物细胞内,通过一定的转染方法(参见细胞转染方法)实现质粒与细胞的融合。线性化的质粒进入到宿主细胞后,与细胞自身的基因组进行整合,同时随着细胞的生长繁殖而生长,过程中在经过一系列的筛选鉴定,排除未正确融合的重组子,或不能稳定表达下去的重组子,最终筛选出可以稳定表达的细胞株,这就是稳定转染/稳定细胞系构建。稳定细胞系构建操作请见:如何构建稳转株

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