抗体亚型的鉴定

亚型指的是相同的构成方式,但是空间结构不同的蛋白质结构。下载抗体亚型,指的是在机体内产生的“Y”构型的免疫球蛋白(Ig),基于小分子多肽结构上的差异,可以进一步的进行细分。

抗体亚型

重链

抗体以一个或者多个“Y”字形单体存在,每个“Y”字形单体由 4 条多肽链组成,包含两条相同的重链和两条相同的轻链。 通常,抗体的种类由重链决定。例如哺乳动物Ig的重链一共有五种,分别用希腊字母α、δ、ε、γ和 μ 来命名,相对应组成的抗体就称为 IgA、IgD、IgE、IgG 和 IgM。其中,人的γ可以进一步细分为γ1、γ2、γ3、γ4等亚类,分别对应IgG1, IgG2, IgG3和IgG4四个亚型,小鼠γ可以进一步细分为γ1、γ2a、γ2b、γ3等亚类,分别对应IgG1, IgG2a, IgG2b和 IgG3四个亚型。

轻链

哺乳动物有两种轻链:λ型和κ型。出于科研的需要,人们也会对轻链的亚型进行鉴定。

类/亚类 重链 轻链 分子量(kDa) 结构 功能
IgA1
IgA2
α1
α2
λ或κ 150-600 单体-四聚体 IgA有血清型和分泌型,血清型IgA不显示重要的免疫功能,分泌型IgA存在于分泌液中,如唾液、泪液、初乳、鼻和支气管分泌液等,是机体粘膜局部抗感染免疫的主要抗体。
IgD δ λ或κ 150 单体 功能不详;
与IgM共同存在于B细胞发育的各个阶段;大部分与B细胞结合。
IgE ε λ或κ 190 单体 结合变应原引发巨细胞释放组胺,可以对抗寄生虫感染。
IgG1
IgG2
IgG3
IgG4
γ1
γ2
γ3
γ4
λ或κ 150 单体 血清中最主要的免疫球蛋白。在免疫反应中最主要的抵御病原的侵袭的抗体为IgG;
可通过胎盘。
IgM μ λ或κ 900 五聚体 最早产生的反应性抗体,在B细胞表面表达,分泌型有很高的亲和力。在B细胞介导的免疫反应早期,产生足够的IgG之前发挥消除病原菌的作用。

表1:不同亚型抗体的结构与功能

抗体亚型鉴定

ELISA测定抗体亚型原理抗体亚型鉴定的原理是利用酶联免疫吸附实验(ELISA),测定待测抗体与不同亚型特异性的抗体的结合情况,找出可以与待测抗体特异性结合的抗体,由于与待测抗体结合的抗体的特异性都是已知的,依据结合抗体的特异性可以得出待测抗体的亚型。以小鼠抗体亚型的测定为例,利用ELISA测定待测抗体与针对小鼠IgG1、IgG2A、 IgG2B、 IgG3、IgM、λ、κ有特异性的抗体的结合情况。如果待测抗体抗体可以与针对小鼠IgG1的特异性抗体结合(通过肉眼观察颜色深浅或通过测OD值判断),则该抗体的亚型为IgG1。以此类推,也可以测出轻链的亚型。

鉴定方法

目前比较常用的方法是利用试剂盒进行抗体亚型的鉴定,按照试剂盒说明书进行操作,便可以直观的读出抗体的亚型。

利用试剂盒鉴定抗体亚型常见问题与解决方法:

常见问题 可能原因 解决方案
多种重链结果 腹水中有杂抗体 将腹水样本至少 1:100000稀释
样本中抗体浓度过高 再将样本 1:2-1:10 稀释
杂交瘤细胞中含有多种细胞系 亚克隆杂交瘤细胞
显色较慢或颜色较弱 样本中抗体浓度低 减少稀释倍数;延长显色时间
结果难以判定 多种重链或轻链结果 再将样本 1:4 或 1:8 稀释后重新检测

表2:常见问题与解决方案

抗体亚型鉴定的意义

不同亚型的抗体在结构上有所区别,其免疫源性与在体内发挥的作用存在差异,对抗体进行进一步的细分,并进行抗体亚型鉴定,对于疾病作用机理的研究、抗体药物的开发有重要意义。

相关服务

抗体亚型鉴定服务:IgG1,IgG2a,IgG2b,IgG3,IgM,IgA的鉴定。

更多阅读

仅供科研

联系我们

电话:(025)5889-4959

咨询:Sales@DetaiBio.com

地址:南京市高新开发区星火路10号

德泰生物科技(南京)有限公司 Detai Biologics Co.,Ltd ©2018 All Rights Reserved

南京市高新技术开发区星火路10号 Sales@DetaiBio.com English